Salmonella spp. prevalence, antimicrobial resistance and risk factor determination in Colombian swine farms / Salmonella spp. prevalência, resistência antimicrobiana e determinação de fatores de risco em granjas suínas colombianas

To determine Salmonella spp. prevalence/seroprevalence, antimicrobial resistance patterns and risk factor identification associated with its presence in Colombian swine farms. 504 samples (Faeces, swabs and environment samples) were obtained from 21 farms distributed in four geographical regions in Colombia. Salmonella spp. microbiological and molecular detection were determined by two Salmonella spp. MDS3M™ and MALDI-TOF MS assays, respectively. In addition, for serological evaluation 231 serum samples were analyzed employing ELISA Salmonella Pigtype®-Salmonella Ab (QUIAGEN®). Additionally, 41 isolates were tested for antimicrobial susceptibility using broth microdilution technique (Panel B1016-180 Beckman Coulter NC72®) and verified with WHONET 2016 software. Risk factors were assessed from a survey and analyzed for statistical significance by U Mann-Whitney test. An 8.9% prevalence (n=45) and 38.1% (n=88) seroprevalence were determined. All isolates presented 100% antimicrobial susceptibility against amikacin. However, resistance against penicillin, tetracycline, cefuroxime and trimethoprim/sulfamethoxazole was present in more than 50% of evaluated strains. Risk factors associated with Salmonella spp. presence were surface water use, rough-surfaced on floors, presence of hoppers as feeders and worker's boots. Bacteria were present in animals and environmental samples from evaluated farms. Animal contact and/or exposure with the microorganism were also evident in obtained serological response. Bacteria presence depended on management practices and infrastructure, likewise antibiotic use, supplemented in the diet may have induced an increase in Salmonella spp. antimicrobial resistance.(AU)

Para determinar Salmonellaspp. prevalência/soroprevalência, padrões de resistência antimicrobiana e identificação de fatores de risco associados à sua presença em granjas suínas colombianas. Foram obtidas 504 amostras (fezes, zaragatoas e amostras do ambiente) de 21 fazendas distribuídas em quatro regiões geográficas da Colômbia. Salmonella spp., a detecção microbiológica e molecular foi determinada por 2 Salmonella spp. Ensaios MDS3M™ e MALDI-TOF MS, respectivamente. Além disso, para avaliação sorológica, foram analisadas 231 amostras de soro empregando ELISA Salmonella Pigtype® - Salmonella Ab (QUIAGEN®). Além disso, 41 isolados foram testados quanto à suscetibilidade antimicrobiana usando a técnica de microdiluição em caldo (Painel B1016-180 Beckman Coulter NC72®) e verificados com o software WHONET 2016. Os fatores de risco foram avaliados em uma pesquisa e analisados quanto à significância estatística pelo teste U Mann-Whitney. Foram determinadas prevalências de 8,9% (n=45) e 38,1% (n=88). Todos os isolados apresentaram 100% de suscetibilidade antimicrobiana à amicacina. No entanto, resistência à penicilina, tetraciclina, cefuroxima e trimetoprim/sulfametoxazol estava presente em mais de 50% das cepas avaliadas. Fatores de risco associados à Salmonella spp., presença de uso de água de superfície, superfície áspera no chão, presença de tremonhas como alimentadores e botas de trabalho. Bactérias estavam presentes em animais e amostras ambientais de fazendas avaliadas. O contato animal e/ou a exposição ao microrganismo também foram evidentes na resposta sorológica obtida. A presença de bactérias dependia de práticas de manejo e infraestrutura, assim como o uso de antibióticos suplementados na dieta pode ter induzido um aumento de Salmonella spp. resistência antimicrobiana.(AU)

Prevalence of Salmonella spp., in mesenteric pig's ganglia at Colombian benefit plants / Prevalencia de Salmonella spp., en ganglios mesentéricos de porcinos en plantas de beneficio Colombianas

ABSTRACT Objective. To determine the prevalence of Salmonella spp., in pigs mesenteric ganglion, from different regions of Colombia. Materials and Methods. A stratified sampling by proportional fixation was carried out at benefit plants of each of the 13 participating departments, whose pork production volume is representative at national level. Sampling was performed during five months, for a total of 457 samples analyzed. Salmonella spp., identification was performed by the MDS Molecular System, later isolates were confirmed in Maldi-TOF MS. Antimicrobial susceptibility of the isolates was determined using the B1016-180 panel and statistical analysis was performed in Whonet 2016, some of the multi-resistant isolates were them serotyped by Kauffman-White method. Results. National prevalence was 28.2%, with the presence of S. Typhimurium, S. Agama, S. London, S. Agona, S. Haifa and S. 1,4,12: i: -. Resistance to antibiotics frequently used in human (23.6% Trimethoprim/Sulfamethoxazole, 2.7% Cefotaxime (CTX), 11.8% Ampicillin (AMP) and 1.8% Ciprofloxacin) was found. Conclusion. The prevalence of Salmonella in mesenteric ganglia was 28.2%, being the Huila region the one with the highest prevalence, recovering atypical serotypes such as S. London and S. Haifa.

RESUMEN Objetivo. Determinar la prevalencia de Salmonella spp., en ganglios mesentéricos de porcinos, provenientes de diferentes regiones de Colombia. Materiales y Métodos. Se realizó un muestreo estratificado por fijación proporcional en plantas de beneficio, de cada uno de los 13 departamentos participantes, cuyo volumen de producción de carne de cerdo es representativo a nivel nacional. El muestreo se realizó durante cinco meses, para un total de 457 muestras analizadas. La identificación de Salmonella spp., se realizó mediante el Sistema Molecular MDS, luego los aislamientos fueron confirmados por Maldi-TOF MS. Se determinó la susceptibilidad antimicrobiana de los aislamientos usando el panel B1016-180 y el análisis estadístico se realizó en Whonet 2016, posteriormente algunos de los aisalmientos multi-resistentes fueron serotipificados por el método de Kauffman-White. Resultados. La prevalencia nacional fue 28.2%, con presencia de los serotipos S. Typhimurium, S. Agama, S. London, S. Agona, S. Haifa y S. 1,4,12: i : --. Se encontró resistencia a antibióticos de uso frecuente en humanos (23.6% Trimetoprim/Sulfametoxazol, 2.7% Cefotaxime (CTX), 11.8% Ampicilina (AMP) y 1.8% Ciprofloxacina). Conclusión. La prevalencia de Salmonella en ganglios mesénticos fue del 28.2%, siendo la región del Huila la que más aportó, se recuperaron serotipos atípicos como S. London y S. Haifa.

Detección e identificación de Salmonella spp. en huevos para consumo humano, provenientes de diferentes localidades de Bogotá, Colombia, 2015 / Salmonella spp. isolation and identification in eggs for human consumption from different urban areas in Bogotá, Colombia, 2015

Objetivo: Determinar la prevalencia de Salmonella spp. en muestras de huevos para consumo humano en localidades de Bogotá. Materiales y métodos: Se obtuvieron 96 muestras en tiendas y plazas de mercado de 4 localidades de la ciudad. Se procesó de forma separada la cáscara y el contenido interno mediante métodos microbiológicos y moleculares para aislamiento e identificación Salmonella spp. Resultados: Se determinó una prevalencia total de Salmonella spp. de 9,4% (n=9), de ésta el 55% (n = 5) provenían del contenido interno y 44% (n = 4) de cáscara, sin embargo no se logró tipificar el serovar de Salmonella enterica presente. Las localidades con mayor presencia del patógeno fueron Usaquén y Fontibón. Discusión: Estudios realizados en Colombia evidencian bajas prevalencias de Salmonella spp. (0 -1,74%) en muestras de huevos, sin embargo los hallazgos de este estudio evidencian una mayor recuperación, lo que podría asociarse con inadecuadas condiciones de manejo y/o almacenamiento del producto. Conclusión: Se estableció la presencia de Salmonella spp. en las muestras de huevo evaluadas, lo que implica un riesgo potencial para la salud pública, por lo que es necesario ampliar este tipo de estudios para conocer la situación real a nivel nacional frente a este patógeno.

Objective: To determine the prevalence of Salmonella spp presence in eggs for human consumption in urban areas in Bogota. Materials and methods: 96 samples were collected from convenience stores and markets in 4 urban areas in the city. The eggshells were separated from the egg's internal content and both were processed separately using microbiological and molecular techniques to isolate and identify Salmonella spp. strains. Results: A Salmonella spp. prevalence of 9.4% (n=9) was found. Salmonella spp was isolated from the egg's internal content in 55% (n=5) of samples and 44% (n=4) from the eggshells. The Salmonella enterica serovar could not be identified. The pathogen was more frequently isolate in samples from Usaquén and Fontibón urban areas. Discussion: Studies of Salmonella spp. prevalence in eggs done in Colombia have shown it to be low (0-1.74%); However, this study determined a higher prevalence. These results suggest that inadequate handling/storage conditions could have been associated with them. Conclusion: Salmonella spp. was isolated from the egg samples from 4 different urban areas in Bogotá. These findings suggest the existence of a public health risk; therefore, there is a need to perform wider and more complete studies to determine the actual situation of Salmonella ssp. egg contamination in the country.

Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE) para la diferenciación molecular de Listeria monocytogenes / Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) for the molecular differentiation of Listeria monocytogenes

En Colombia no es obligatoria la notificación deL. monocytogenes en alimentos, pero se vigilan los alimentos dealto riesgo. Clínicamente se reportan como microorganismoGram-positivo sólo cuando causan meningitis. L. monocytogeneses un patógeno intracelular, transmitido por alimentos, letalpara humanos y animales, que causa Listeriosis; enfermedadque genera varios brotes en el mundo, con pérdidashumanas y económicas. Pocos trabajos en Colombia hanlogrado identificar y serotipificar molecularmente losaislamientos, lo que sólo permite distribuir teóricamentelos serotipos en linajes. Esta revisión se limita a mostrarcaracterísticas del patógeno, su importancia en salud públicay en la industria de alimentos, generalidades de la PFGECHEF;identificando el protocolo estandarizado de trabajoy las enzimas de restricción adecuadas para cortar el ADN.Se encontró que la combinación de enzimas XbaI-AscI,seguida de ApaI es la que ofrece mejores resultados en ladiferenciación de los aislamientos; agrupándolos por linajes;mostrando variaciones intra-serotipo y que en varios paíseslatinoamericanos se analizan los resultados a través dePulseNet, lo que garantiza la comparación de los patronesde PFGE en igualdad de condiciones...

The reporting of L. monocytogenes in food in Colombia is not a mandatory; however, foods consideredhigh-risk are monitored, and the organism is only reported clinically as Gram-positive when it causesmeningitis. L. monocytogenes is a foodborne, intracellular, pathogen which causes listeriosis, a disease lethalto humans and animals. Outbreaks of this disease worldwide can bring about human and economiclosses. Only a few studies in Colombia have been able to identify and molecularly serotype isolatesallowing only the theoretical distribution of serotypes by lineage. This review explains the characteristicsof the pathogen, its importance in public health and in the food industry, and provides an overview ofPFGE-CHEF; identifying the standard work protocol and the appropriate restriction enzymes to cutDNA. We found that the enzyme combination, XbaI-AscI, followed by ApaI offers the best results todifferentiate isolates, by grouping them by lineages, and displaying intra-serotype variations. Additionally,we found that in several Latin American countries the results are analyzed using PulseNet; this ensuresthe comparison of PFGE patterns in equivalent conditions...

Na Colômbia não há uma notificação compulsóriade L. monocytogenes em alimentos, mas alimentos de altorisco são monitorados. Clinicamente, são relatados comoorganismos Gram-positivos apenas quando eles causammeningite. L. monocytogenes é um patógeno intracelularde origem alimentar, letal para seres humanos e animais,que causa a listeriose, que gera surtos em todo o mundo,com perdas humanas e econômicas. Poucos trabalhos naColômbia identificaram e sorotipificaram molecularmenteos isolados, que só permite a distribuição de sorotiposteoricamente em linhagens. Esta avaliação é limitada amostrar características do patógeno, sua importância nasaúde pública e na indústria de alimentos, e uma visãogeral do PFGE-CHEF; identificar o protocolo-padrão detrabalho e enzimas de restrição apropriadas para cortar oADN. Verificou-se que a combinação de enzimas XbaIAscI,seguido por ApaI representa a combinação de enzimasque ofereceu melhores resultados na diferenciação dosisolados, agrupando-a por linhagens, mostrando a variaçãointra-serotipo e que, em muitos países da América Latina,os resultados são analisados através PulseNet, que asseguraa comparação de padrões de PFGE em igualdade decondições...

Prevalencia de Listeria monocytogenes en carnes y derivados de la industria porcícola colombiana / Prevalence of Listeria monocytogenes in pork-meat and other processed products from the Colombian swine industry

Objective. To determine the prevalence of L. monocytogenes in pork carcasses, meat cuts, and meat products (“chorizo”, sausage and ham). Materials and methods. Stratified sampling was implemented in meat-processed products. We analyzed 566 (37%) carcasses, 472 (31%) meat cuts, and 481, (32%) meat-processed products, distributed as follows: 169 (11%) sausage, 163 (11%) ham, and 149 (10%) “chorizo”, for a total of 1519 (100%) samples in a period of 18 months. The samples were processed using the ISO-17604, ISO-11290-1 and the USDA/FSIS (MLG-8.03) methods. Genus and species were confirmed by multiplex-PCR. Results. We obtained isolates of L. monocytogenes from 21 carcasses (10%), 160 (76%) from meat deboning, 10 (5%) from ham, 6 (3%) from “chorizo”, and 13 (6%) from sausage. The prevalence found was 3.7% and 33.9% in carcasses and meat deboning respectively. The prevalence in the meat-processed products was 4.03% in “chorizo”, 6.13% in ham and 7.69% in sausage. The overall prevalence of L. monocytogenes in the study was 13.82%. Conclusions. We found L. monocytogenes in different products analyzed, with particular interest in ham and sausage since both are consumed without previous heat treatment.

Evaluación de tres métodos para la inactivación de coliformes y Escherichia coli presentes en agua residual doméstica, empleada para riego / Evaluation of three methods for the inactivation of coliforms and Escherichia coli present in domestic wastewaters used in irrigation / Avaliação de três métodos para a inativação de coliformes totais e Escherichia coli presentes em águas residuais domésticas utilizadas para a irrigação

Objetivo. Evaluar tres tratamientos (lagunaje, fotocatálisis con TiO2 y desinfección química) para la inactivación de coliformes totales y Escherichia coli presentes en agua residual doméstica empleada para riego agrícola. Materiales y métodos. El agua residual fue caracterizada por medio de análisis físicos, químicos y microbiológicos. Posteriormente fue sometida a un tratamiento de lagunaje facultativo (TLF), pos tratamiento fotocatalítico (PTFTiO2/UV) y pos tratamiento químico (PTQ NaClO). Valorando la capacidad desinfectante de cada uno de ellos para inactivar coliformes totales y E. coli. A continuación se procesaron tres nuevos lotes de agua residual y se utilizaron para realizar pruebas de riego a escala de laboratorio por 30 días, empleando como modelo plantas de Lactuca sativa variedad Batavia y evaluando la concentración inicial y final de los dos grupos. Resultados. El PTFTiO2/UV fue significativamente superior que TLFLF y el PTQ NaClO (p<0,0001) obteniendo 100% de inactivación para coliformes y E. coli a los 30 minutos de irradiación a escala de reactor. Respecto a las pruebas de riego de L. sativa se demostró que al utilizar el agua tratada por PTFTiO2/UV no se presentó contaminación con E. coli y coliformes a los 30 días de proceso. Por el contrario en las plantas regadas con agua tratada por TLF y PTQ NaClO se observó un incremento en las dos poblaciones generando un problema de contaminación de las hortalizas al finalizar la prueba de laboratorio. Conclusión. La fotocatálisis heterogénea TiO2 fue un método eficaz para la reducción de coliformes y E.coli en aguas residuales domésticas.

Objective. To evaluate three treatments (facultative stabilization ponds, heterogeneous photocatalysis with TiO2 and chemical disinfection with sodium hypochlorite) for the inactivation of coliforms and Escherichia coli presen in domestic wastewaters used in agricultural irrigation. Materials and methods. Wastewater was characterized by physical, chemical and microbiological analyses and was then exposed to a facultative pond treatment (FPT), post-photocatalytic treatment (PTFTiO2/UV) and post-chemical treatment (PTQNaClO) to assess the disinfecting capacity of each method in the inactivation of total coliforms and E. coli. Three new samples of wastewater were processed and used in irrigation tests on a laboratory-scale basis for 30 days, using Lactuca sativa cultivar. Batavia as a model plant and evaluating the initial and final concentrations of the two groups. Results. PTFTiO2/UV was significantly higher than FPT and PTQNaClO (p<0.0001), obtaining 100% of inactivation of coliforms and E. coli after 30 minutes of irradiation at a reactor scale. Regarding the irrigation tests with L. sativa, we showed that using water treated by PTFTiO2/UV there is no contamination with E. coli and coliforms after 30 days. On the contrary, plants irrigated with water treated by FPT and PTQNaClO showed an increase in the two populations originating a contamination problem in the vegetable by the end of the laboratory experiments. Conclusion. The heterogeneous photocatalysis with TiO2 was an effective method in the reduction of coliforms and E. coli present in domestic wastewater.

Objetivo. Avaliar três tratamentos (lagoas, fotocatálise com TiO2 e desinfecção química) para inativação de coliformes totais e Escherichia coli presentes em águas residuais domésticas utilizadas na irrigação dos cultivos. Materiais e métodos. O efluente foi caracterizado por analises físicos, químicos e microbiológicos. Posteriormente foi submetido a tratamento de lagoas facultativas (TLF), pós-tratamento fotocatalítico (PTF TiO2/UV) e pós-tratamento químico (PTQ NaClO). Avaliando a capacidade desinfetante de cada um para inativar coliformes totais e E. coli. Posteriormente, foram processados três novos lotes de águas residuais para testar a irrigação em escala de laboratório por 30 dias, utilizando-se como modelo plantas de Lactuca sativa variedade Batavia e avaliando a concentração inicial e final dos dois grupos. Resultados. O PTFTiO2/UV foi significativamente maior a TLFLF e PTQ NaClO (p<0,0001) apresentando 100% de inativação para coliformes e E. coli em 30 minutos de irradiação a escala do reator. Quanto aos testes de irrigação de L. sativa foi demonstrado que, ao utilizar a água tratada com PTFTiO2/UV não se apresentou contaminação com E. coli e coliformes a 30 dias do tratamento. Em contrapartida, em plantas irrigadas com água tratada por TLF e PTQ NaClO observou-se um aumento nas duas populações gerando um problema de contaminação de hortaliças no final do teste de laboratório. Conclusão. A fotocatálise heterogênea TiO2 foi um método eficaz para reduzirem coliformes e E. coli em águas residuais domésticas.

Efecto de tiempo y temperatura de cocción en chorizo inoculados artificialmente con Listeria monocytogenes / Effect of cooking time and temperature on sausages artificially inoculated with Listeria monocytogenes / Efeito do tempo e temperatura de cozimento em lingüiças inoculadas artificialmente com Listeria monocytogenes

Objetivo. Determinar si los tiempos utilizados por los consumidores para la cocción de chorizos son suficientes para la inactivación de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente en este producto. Materiales y métodos. Se realizó una encuesta a 50 amas de casa para preguntar sobre los hábitos de preparación de los chorizos. Se analizaron 60 muestras de chorizos a las que se les inocularon concentraciones de 10³ UFC g-1 de un pool de 5 cepas de L. monocytogenes, se aplicaron los procedimientos de cocción indicados por la encuesta y se hizo recuento inmediatamente. Adicionalmente, se realizó una prueba complementaria donde se inocularon 20 muestras de chorizos con poblaciones de 10³ UFC g-1 y se sometieron a 72 y 73°C durante 30 segundos. Resultados. Mediante la encuesta se logró establecer que 15 minutos de cocción y 5 minutos de fritura es la forma más frecuente de preparación por parte de los consumidores, se logró establecer que el tiempo y las condiciones utilizadas en este ensayo tuvieron un efecto estadísticamente significativo (0,016) sobre la población inoculada. En el ensayo complementario los datos estadísticos (p: 0,0001) indicaron que temperaturas internas de 73°C son suficientes para la inactivación de este patógeno a nivel industrial. Conclusión. Tiempos de 15 minutos de cocción y 5 minutos de fritura son suficientes para inactivar concentraciones de 10³ g-1 de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente en chorizos.

Objective. To find whether the cooking times traditionally used by consumers are enough to inactivate Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages. Materials and methods. A survey asking about sausage cooking habits was completed with 50 housewives. We analyzed 60 samples of sausages previously inoculated with 10³ CFU g-1 from a pool of 5 strains of L. monocytogenes, then the cooking procedures described in the survey were applied to the samples, and counting was done immediately after. Additionally, a complementary test was carried out by inoculating 20 samples of sausages with 10³ CFU g-1 and exposing them to 72°C and 73°C for 30 seg. Results. The survey showed that 15 minute boiling and 5 minute frying are the most frequent ways of preparing sausages by consumers. We established that the time and cooking conditions used in our assay had a statistically significant effect (p: 0.016) on the inoculated samples. In the complementary assay, statistical data (p: 0.0001) indicated that internal temperatures of 73°C are enough to inactivate the pathogen at an industrial scale. Conclusion. Cooking by 15 minute boiling and 5 minute frying are enough to inactive concentrations of 10³ g-1 of Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages.

Objetivo. Determinar se o tempo utilizado pelos consumidores para cozinhar lingüiças são suficientes para a inativação de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente neste produto. Materiais e métodos. Foram realizadas entrevistas a 50 donas de casa para perguntar sobre os hábitos de preparação das lingüiças. Foram analisadas 60 amostras de lingüiças para as quais foram inoculadas concentrações de 10³ UFC g-1 de um pool de 5 cepas de L. monocytogenes, foram utilizados procedimentos de cozimento indicados pelas entrevistas e foi feita uma contagem imediatamente. Além disso, foi realizada uma prova complementaria inoculando 20 amostras de lingüiças com populações de 10³ UFC g-1 e submetidas a 72 e 73°C por 30 segundos. Resultados. Através das entrevistas foi estabelecido que 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura é a forma mais freqüente de preparação por parte dos consumidores, foi estabelecido que o tempo e as condições utilizadas neste estudo foi estatisticamente significativa (0,016) sobre a população inoculada. Na prova complementaria os dados estatísticos (p = 0,0001) indicaram que temperaturas internas de 73°C são suficientes para a inativação deste patógeno ao nível da indústria. Conclusão. Tempo de 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura são suficientes para desativar as concentrações de 10³ g-1 de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente em lingüiças.

Incidencia de Listeria spp. en carcasas de pollo congelado en un supermercado del nororiente de Bogotá / Incidence of Listeria spp., in frozen poultry carcasses at supermarket in northwest Bogotá

Listeria spp. es un género bacteriano que contamina alimentos de origen animal, incluido el pollo, yl puede permanecer viable durante las cadenas de producción y distribución. En el presente trabajo se analizaron 91 muestras de carcasas de pollo, obtenidas en una distribuidora en el nororiente de Bogotá; las muestras se tomaron en un período de 9 semanas y luego fueron procesadas. De las 91 carcasas, 40 (43.95%) resultaron positivas para Listeria spp. La presencia de este microorganismo puede estar asociada a deficiencias en los sistemas de tecnología de limpieza en las plantas de beneficio y/o contaminación con utensilios durante el desprese.

Resistencia antimicrobiana y a desinfectantes de Listeria spp: [revisión] / Antimicrobial and disinfectants resistance of Listeria spp: [review]

Listeria spp. es un género bacteriano que se adapta fácilmente a cambios ambientales y a condiciones químicas y físicas, por eso no es sorprendente la aparición de resistencia a desinfectantes de uso frecuente en las industrias de alimentos. La capacidad para adquirir genes de resistencia antimicrobiana a partir de otras especies bacterianas, hace que este género deba ser observado cuidadosamente desde el punto de vista epidemiológico. Aunque aún no se ha demostrado que el abuso de antimicrobianos como promotores de crecimiento en la producción de animales (vacas, cerdos y aves, entre otros), esté relacionado directamente con el aumento de la resistencia antimicrobiana, es inevitable llamar la atención sobre esta práctica. En este artículo se hace una revisión sobre la taxonomía, el serotipo, factores de virulencia, el uso de antibióticos en la industria y la resistencia antimicrobiana de Listeria spp.